GB 4789.2-2022《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定》變化解析

在食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定中，由于定量的對(duì)象是肉眼不可見的微米級(jí)微生物生命體，菌落總數(shù)測(cè)定結(jié)果一直存在著一定的不確定性，縱觀檢驗(yàn)全部流程，其中稀釋的準(zhǔn)確性、菌落識(shí)別的準(zhǔn)確性以及無菌控制這幾個(gè)方面是產(chǎn)生誤差，進(jìn)而引起結(jié)果不確定性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

為了提升菌落總數(shù)測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定》GB4789.2從2016版到2022版著重加強(qiáng)這幾個(gè)方面的控制。
● 在液體樣品制備環(huán)節(jié)，增加了使用拍擊式均質(zhì)器制備1:10樣品勻液的實(shí)驗(yàn)步驟；
● 在樣品稀釋環(huán)節(jié)，將吸管反復(fù)吹打混勻方式改為振蕩器振蕩混勻方式；
● 在菌落檢測(cè)環(huán)節(jié)，增加了菌落總數(shù)測(cè)試片的檢測(cè)方法；

稀釋的準(zhǔn)確性

稀釋是菌落總數(shù)測(cè)定的重要環(huán)節(jié)，若因混勻程度不達(dá)到100%，則間接產(chǎn)生稀釋誤差，并且誤差隨稀釋倍數(shù)的增加而呈幾何級(jí)數(shù)增長。

拍擊式樣品稀釋方式是被驗(yàn)證能夠達(dá)到良好的混勻度的實(shí)驗(yàn)方式，所以2022版新國標(biāo)將液體樣品的稀釋也要求采取拍擊式混勻操作；拍擊式混勻操作，可以有效地通過施加外界機(jī)械力而促進(jìn)樣品與稀釋液之間的振動(dòng)，從而達(dá)到快速而徹底的混勻，有效地避免或減少因未能充分混勻而產(chǎn)生的稀釋誤差。

瑞士iNLABTEC Serial UC連續(xù)梯度稀釋儀，采用拍擊式混勻方式，自動(dòng)拍擊器可加強(qiáng)稀釋樣液的振動(dòng)，僅需4秒即可達(dá)到100%的混勻度。

● 無需吸管吹打操作，符合GB4789.2-2022新國標(biāo)的要求；

● 4秒拍擊式混勻方式，實(shí)現(xiàn)混勻的充分性與高效性；

● 使用無菌Tip頭、無菌稀釋袋、無菌開袋器，完全符合無菌控制要求。

菌落識(shí)別的準(zhǔn)確性

瓊脂上的菌落是由肉眼不可見的細(xì)菌細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)塊，經(jīng)培養(yǎng)后，分裂繁殖形成的肉眼可見的細(xì)菌團(tuán)塊。因?yàn)榧?xì)菌各類不同而菌落形態(tài)差異很大，故菌落識(shí)別至今尚未形成標(biāo)準(zhǔn)化的判定。

為了保證樣品中的細(xì)菌不受局限生長空間的拮抗作用影響，而采取傾注法制備樣品平皿。但菌落生長于瓊脂中，就增加了菌落識(shí)別的復(fù)雜度。如菌落粘連、菌落重疊、瓊脂氣泡等。

2022版新國標(biāo)新增了菌落總數(shù)測(cè)試片的檢測(cè)方法，菌落總數(shù)測(cè)試片只需識(shí)別菌落產(chǎn)生的色斑即可判定菌落，有效地降低了瓊脂識(shí)別菌落的難度，亦為減少菌落識(shí)別誤差的解決方法，但菌落測(cè)試紙片上能夠形成顯色菌斑的細(xì)菌，只滿足能夠在測(cè)試紙片的培養(yǎng)基上生長，且能夠產(chǎn)生與底物的顯色反應(yīng)的細(xì)菌，目前尚無更全面的驗(yàn)證數(shù)據(jù)，故整篇標(biāo)準(zhǔn)中關(guān)于測(cè)試紙片法只在6.2.2中一句帶過，并無詳盡指導(dǎo)與解釋。

Punmicro ICON全自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)儀創(chuàng)新引入人工智能技術(shù)，對(duì)于復(fù)雜的傾注法樣品平皿上的菌落具有客觀而精確的識(shí)別能力，可有效提升菌落計(jì)數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

● AI人工算法技術(shù)，可自主學(xué)習(xí)菌落判定規(guī)則，結(jié)合高分辨成像系統(tǒng)，可達(dá)到甚至超越人工計(jì)數(shù)水平，解決重疊菌落、粘連菌落、異形菌落等復(fù)雜菌落識(shí)別判定問題；

● 全皿計(jì)數(shù)，有效區(qū)分培養(yǎng)皿邊緣折光與反光，解決邊緣菌落自動(dòng)識(shí)別計(jì)數(shù)問題；

● 一鍵計(jì)數(shù)，無需人工根據(jù)樣品狀況進(jìn)行大量的參數(shù)設(shè)定，樣品直接計(jì)數(shù)，解決全自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)儀的實(shí)用性問題；

● 可進(jìn)行菌落測(cè)試紙片分析，在高分辨成像系統(tǒng)的加持下，解決人工肉眼不易辨識(shí)的重合菌斑的識(shí)別；

● 可進(jìn)行圖片與數(shù)據(jù)的全面記錄，并可定制數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)運(yùn)算與檢測(cè)報(bào)表格式。

無菌控制

無菌控制對(duì)于菌落總數(shù)測(cè)定是一項(xiàng)基礎(chǔ)而重要的要求，避免外源性污染與交叉污染直接關(guān)系到檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

2022版新國標(biāo)關(guān)注到10倍系列稀釋的操作過程中，使用吸管反復(fù)吹打來實(shí)現(xiàn)混勻的操作存在著極大的外源污染的風(fēng)險(xiǎn)，故改用振蕩器進(jìn)行振蕩混勻。

但振蕩器對(duì)于稀釋體系的振動(dòng)幅度遠(yuǎn)不如反復(fù)吹打，若想達(dá)到100%混勻程度，唯一的方法就是延長振蕩時(shí)間，這種方式將顯著降低實(shí)驗(yàn)操作的速度。